Terapia Génica para Neumonía

Tema: Micro-ARN en la regeneración de pulmones: un análisis de biología de sistemas integradores de la neumonía por influenza murina. 
La medicina regenerativa como una nueva estrategia de manejo de la influenza
Tipo de terapia génica: in vivo, con kit de extracción de miARN miRNeasy (Qiagen) en ratones BALB / c de 6-8 semanas.
Dirigido hacia: ADN, genes que codifican para: antígeno nuclear celular proliferante (PCNA) y proteína C surfactante (SP-C),  miRNAs asociados a células madre (MiR-290).                                      
Dirigido por: miARN y microarrays de genes.
Órgano a tratar: Lóbulos pulmonares
Vía de administración: intratraqueal.
Resultados:
-Los miRNA desempeñan papeles cruciales durante la reparación de los pulmones después de una lesión.
-Controlar la expresión de los activadores e inhibidores de la proliferación pueden conducir a un estado similar al desarrollo en contraste con la progresión del cáncer
-Comprensión básica de la reparación tisular de los pulmones dañados.
-Reparación y reconstrucción de la arquitectura pulmonar después de la infección.

Referencias bibliograficas:

Disponible en: https://bmcgenomics.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-2164-15-587

Terapia con stem cells en Neumonia

Tema: Células estromales mesenquimales inducidas por hipoxia exhiben un efecto terapéutico potenciado sobre la lesión pulmonar inducida por radiación en ratones debido a un aumento en el potencial de proliferación y una capacidad antioxidante mejorada.

Tipo de Stem Cells:  bmMSCs primarios de la médula de ratones C57BL6 / J machos de seis semanas de edad

Métodos: 

• Se cultivaron en condiciones normóxicas o hipóxicas. 
• Los efectos terapéuticos de las MSC en RILI se evaluaron mediante exámenes patológicos que incluían tinción con H y E, tinción con Masson y tinción con α-SMA
• Los factores inflamatorios se midieron usando un ELISA. 
• La morfología de las MSC in vitro se registró usando un microscopio y se identificó mediante citometría de flujo
• La viabilidad celular se midió usando el ensayo CCK-8
• El potencial de proliferación se detectó mediante el ensayo EdU 
• Los niveles de ROS se midieron usando una sonda fluorogénica ROS. 
• HIF-1α y varias proteínas de la vía de supervivencia (Akt, p-Akt, Caspase-3) también se detectaron mediante transferencia Western.

Resultados: 

1. Las MSC implantadas aliviaron  la neumonía temprana 
2. Las MSCs de hipoxia mostraron un efecto terapéutico más pronunciado en comparación con las MSCs de normoxia.
3. Las MSC de normoxia, las MSC de hipoxia demostraron una mayor viabilidad celular, un mayor potencial de proliferación, niveles reducidos de ROS y una mayor resistencia a la hipoxia y el estrés de ROS. 

Referencias:

Karger, S. Department of Radiation Medicine, Faculty of Naval Medicine, Second Military Medical University, Shanghai, China.Cell Physiol Biochem. 2017. (actualizacion noviembre de 2017; consultado 13 de diciembre de 2017). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29183009

ADN recombinante: en la naturaleza y artificial

ADN recombinante artificial

Tema: Variación significativa en la frecuencia de transformación en Streptococcus pneumoniae

Objetivo: . Mantener la transformación natural dentro de una especie requiere que los beneficios de la transformación superen sus costos.

Gen: comC y comD

Enzima de restricción: Hinf I 

Enzima ligasa:------------------
Vector: SPSS v.18
Célula receptora: haemophilus influenzae
Método de inserción del gen: Transformación 
Método de identificación: cultivo, PCR,  Phusion DNA polimerasa, secuenciación de Sanger, antibiograma

 ADN recombinante en la naturaleza

Tema: Ingeniería genética o tecnología del ADN recombinante
Objetivo: observar moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no presentan homología y que pueden proceder de organismos diversos. 
Gen: Gen amp
Enzima de restricción: SalI, PstI, BamHI 
Enzima ligasa: --------------- 
Vector: Vector híbrido, fago  
Célula receptora: Célula bacteriana (streptococcus pneuminiae)
Método de inserción del gen: Transformación 
Método de identificación: Electroforesis

Referencias:

Evans, B.  Significant variation in transformation frequency in Streptococcus pneumoniae. The Isme Journal. 2013. ( actualizacion: abril de 2013; consultado: 7 de diciembre de 2017). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title%20Word&term=Evans%5Bauthor%5D%20AND%20Significant%20variation%20in%20transformation%20frequency%20in%20Streptococcus%20pneumoniae

Società Scientifica di Nutrizione Vegetariana.  Ingeniería genética o tecnología del ADN recombinante (actualizacion: 29 de Julio de 2015; consultado: 7 de diciembre de 2017).  Disponible en:  https://ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.htm

Prueba molecular: la técnica de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP)

Tema: Métodos moleculares de diagnóstico de infecciones respiratorias. ¿Ha cambiado el esquema diagnóstico? 

Objetivo: Hacer una revisión de las diversas técnicas de biología molecular aplicadas al diagnóstico de las infecciones respiratorias, centrándose fundamentalmente en la neumonía, y analizar el impacto que pueden tener en el manejo del paciente con infección respiratoria aguda

Muestra: esputo

Cebadores: 4 cebadores como mínimo y 6 como máximo todos ellos altamente especializados.  2 cebadores externos F3 y B3, 2 cebadores internos FIP (F1C, F2) y BIP (B1C, B2) que tienen secuencias tanto sentido y antisentido de tal manera que ayuda en la formación de un bucle, 2 cebadores bucle F(FLP) y B(BLP) diseñados para acelerar el reacción de amplificación mediante la unión adicional a sitios que no son accesibles por los cebadores internos. 

Proteínas: ADN POLIMERASA

Tipo de acido nucleico: ADN

Tipo de prueba: técnica de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP)

Visualizacion: los resultados pueden ser vistos a simple vista debido a la turbidez que forma después de la reacción, también se pueden usar reactivos como la calceina (método visual por fluorescencia), CYBR green, que dan cierta coloración cuando la reacción se torna positiva.

Referencias:

Vila, J. Métodos moleculares de diagnóstico de infecciones respiratorias. ¿Ha cambiado el esquema diagnóstico?. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2016. (actualizacion 2017; consultado: 2 de diciembre de 2017). disponible en: http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-linkresolver-metodos-moleculares-diagnostico-infecciones-respiratorias--S0213005X1630218X

file:///C:/Users/PCS/Downloads/S0213005X1630218X_S300_es.pdf

Sanchez, E. Amplificación isotérmica mediada por LOOP (LAMP) de ácidos nuclecios en el diagnostico clínico. Scielo. 2014. (actualizacion 2014; consultado: 2 de diciembre de 2017). disponible en: http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?pid=S2310-02652014000100014&script=sci_arttext

PCR en la Neumonía

Tema: Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad 
Objetivo: Mediante métodos moleculares, describir simultaneamente los gérmenes comunes aislados por métodos microbiológicos convencionales (M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila).
Muestra: secreción faríngea, lavado broncoalveolar y esputo

ADN: BACTERIANO

Genes a amplificar: 16S rRNA, OMP

PCR: Múltiple

1. Desnaturalización: Técnica de Mejuto y colaboradores
2. Hibridación: 55°C y la Técnica de Mejuto y colaboradores
3. Extensión: Técnica de Mejuto y colaboradores
4. Numero de ciclos: Técnica de Mejuto y colaboradores

Visualización: Electroforesis

Referencias:

Guillén R. Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad que concurrieron al INERAM. 

Memorias del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (actualizacion en 2012; consultado el 26 de noviembre de 2017) Disponible en: http://scielo.iics.una.py/scielo.php?pid=S1812-95282012000100004&script=sci_arttext

Prueba de tamizaje y confirmatoria

Prueba de Tamizaje 

La prueba de tamizaje es una prueba para detectar la Neumonia  y de esta manera prevenirla. El diagnóstico de presunción se basa en la historia, la radiografía de tórax, el cultivo y el Gram de las muestras apropiadas. El medico buscará crepitaciones o ruidos respiratorios anormales al auscultar el tórax con el estetoscopio. La percusión le ayuda al mèdico a escuchar y sentir ruidos anormales en el pecho. Durante el examen físico, el médico evaluará si está respirando rápidamente. Ordenará una radiografía del tórax si tiene sospechas de neumonia.

Prueba Confirmatoria 

• Hemocultivo y cultivo de esputo: para buscar microbios que pueden estar causando la neumonía.
• Conteo sanguíneo completo: para verificar el conteo de glóbulos blancos.

• Broncoscopia: Una sonda flexible con una cámara iluminada en su extremo que se baja por los pulmones, en casos selectos.

Referencias bibliográficas:

Rivera, C. Neumonía. 2015 (actualizado el 12 de noviembre de 2015, acceso 19 de noviembre de 2017). Disponible en: http://www.dmedicina.com/enfermedades/respiratorias/neumonia.html

 Hadjiliadis, D. Neumonía en adultos (extrahospitalaria). 2015 (actualizado el 22 de junio de 2015, acceso el  19 de noviembre de 2017). Disponible en: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000145.htm

Alteraciones de la Epigenomica

Algunos fenómenos epigenéticos que aumentan el riesgo de neumonía incluyen: 

-Muchos de los genes que controlan nuestra susceptibilidad a las enfermedades infecciosas codifican proteínas que funcionan en el sistema inmunitario. Sus polimorfismos parecen asociarse con un aumento o disminución de la susceptibilidad a diversas enfermedades infecciosas. Las proteínas del surfactante (SP) son miembros de la familia de las colectinas secretadas por los neumocitos tipo II. Se conocen distintos polimorfismos en los genes de SP-A, B, C y D. El genotipo SP-B +1580 CC supone una variación timina/citosina en la posición 1580 en el exón 4, lo que condiciona un cambio de treonina a isoleucina en la cadena de aminoácidos de la proteína y determina una disminución de SP-B funcional. 

- Infección por bacterias virus y hongos.

- La contaminación del aire ha sido identificada como un factor potencial de riesgo.

- El hábito tabaquismo materno durante el embarazo también aumenta el riesgo en  el niño, a través de mecanismos epigenéticos. El estrés psicológico materno aumenta los niveles de IgE en el cordón umbilical. Es posible que este fenómeno se relacione con supresión de la producción de citoquinas Th-1 por trofoblastos de la placenta y con el desarrollo del sistema inmune.

- La exposición a contaminación intradomi-ciliaria más que duplica el riesgo de neumonía. Hay otros contaminantes, especialmente el humo de tabaco.

Los mecanismos epigenéticos como la metilación del DNA y la modificación de histonas (como la acetilación, metilación, fosforilación y ubiquitinación), sirven como señales reconocidas por complejos que modifican la estructura de la cromatina, dando lugar a cromatina transcripcionalmente activa o no.

                 

Referencias bibliograficas:

         

Ferrer, J. Neumonía adquirida en la comunidad: variantes génicas implicadas en la inflamación sistémicamación sistémica. Medicina intensiva. 2014. (actualizada en junio de 2014; consultado el 12 de noviembre de 2017). disponible en: http://www.medintensiva.org/es/neumonia-adquirida-comunidad-variantes-genicas/articulo/S0210569113001836/
Gavidia, T. Sly Peter. Impactos ambientales sobre la salud respiratoria de los niños.  Scielo. Revista chilena de pediatría . [actualizacion en 2012, consultado el 12 de noviembre de  2017]. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0717-73482009000200006&script=sci_arttext